在繼續(xù)探討HGC-27細(xì)胞，即人未分化胃癌細(xì)胞的操作步驟時，我們需細(xì)致入微地確保每一步的精確性和無菌操作的重要性。
首先，進行細(xì)胞復(fù)蘇時，需快速將凍存的HGC-27細(xì)胞從液氮中取出，并迅速置于37℃水浴中輕輕搖晃，確保細(xì)胞在1分鐘內(nèi)融化。隨后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)裝有培養(yǎng)基的離心管中，輕柔混勻后離心，去除上清液，再加入新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代時，待細(xì)胞長至80%-90%融合度，棄去舊培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次后，加入適量胰酶消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、間隙增大時，加入培養(yǎng)基終止消化，吹打制成細(xì)胞懸液，按一定比例分至新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
此外，細(xì)胞凍存也至關(guān)重要。選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞，按上述方法消化、離心后，用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至適宜范圍，分裝至凍存管中，標(biāo)記好細(xì)胞名稱、凍存日期等信息后，按梯度降溫法逐步冷凍，最終置于液氮中長期保存。
在整個操作過程中，嚴(yán)格的無菌操作、精準(zhǔn)的細(xì)胞計數(shù)以及適時的培養(yǎng)基更換，都是確保HGC-27細(xì)胞健康生長和實驗成功的關(guān)鍵。
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